voopoo ภายหลังที่หนูถูกฆ่าตายด้วย pentobarbital สมองก็ถูก

voopoo
voopoo
voopoo

การวิเคราะห์ RT-PCR voopoo แบบเรียลไทม์เชิงจำนวน
ภายหลังที่หนูถูกฆ่าตายด้วย pentobarbital สมองก็ถูกคัดแยกออก ส่วน 

hippocampus voopoo จะฟื้นและก็เก็บไว้ที่อุณหภูมิ –80 °C ตราบจนกระทั่ง RNA ถูกดึงออกมาจากแบบอย่าง ใช้โปรโตคอลมาตรฐานในการแยก RNA โดยใช้ TRIzol Reagent (Invitrogen, Carlsbad, CA) แล้วก็แบบอย่าง RNA ได้รับกระบวนการทำให้บริสุทธิ์ในเวลาถัดมาโดยใช้ RNeasy Mini Kit (Qiagen, Valencia, CA) RNA ถูกหาจำนวนโดยใช้ NanoDrop ND-1000 fluorospectrometer (Thermo Scientific, Waltham, MA) ระดับการแสดงออกของยีนสำหรับนิวโรโทรฟินถูกประเมินในแบบอย่างฮิปโปโปเตมัสแคมปัสของบุตรหลานโดยใช้ qRT-PCR ยีนที่เลือกในการประเมินติดตามผล ยกตัวอย่างเช่นNgfr , Bdnfและก็Gdnf ( ตารางที่ 1 ) การทดลองการแสดงออกของยีน TaqMan ที่มีจัดจำหน่ายในตลาด ( ตารางที่ 1) สำหรับหนู (Life Technologies, Grand Island, NY) ถูกใช้สำหรับเพื่อการจัดแจงอย่าง ซึ่งประเมินผลโดยใช้ QuantStudio 6K Flex Real Time PCR System (Applied Biosystems, Foster City, CA) ระดับการแสดงออกของ mRNA เชิงจำนวนคำนวณโดยใช้แนวทาง ΔΔCT แล้วก็ทำให้เป็นมาตรฐานสำหรับยีนอ้างอิง glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase ( Gapdh )

การวิเคราะห์ไซโตไคน์/คีโมไคน์ในซีรัม
เลือดจากร่างกายถูกเก็บจากหนูในระหว่างที่กระทำการสังเวย และก็ซีรัมถูกเก็บไว้ที่ –20 °Cจนถึงการวิเคราะห์ แบบอย่างถูกส่งบนน้ำแข็งแห้งไปยัง Immune Monitoring Core ที่ศูนย์การแพทย์ NYU Langone ซึ่งได้รับการวิเคราะห์หาระดับของ IL-6, TNFα, IL-1β, IFNγ, IL-2 แล้วก็ MCP-1 สารพินิจพิจารณาในซีรัมถูกวัดโดยการใช้ Milliplex mouse cytokine/chemokine magnetic bead panel MCYTOMAG-70K (Millipore, Billerica, MA) การทดลองเพลท 96 หลุม เพลตถูกสแกนด้วยอุปกรณ์ Luminex 200 โดยที่ข้อมูลความเข้มของฟลูออเรสเซนต์ค่ามัธยฐานถูกพินิจพิจารณาโดยใช้กระบวนการปรับเส้นโค้งลอจิสติกส์ห้าพารามิเตอร์ในการคำนวณความเข้มข้นของไซโตไคน์/คีโมไคน์ในแบบอย่าง